烟草(云烟87)NBS-LRR类同源抗病基因克隆及分析

• 作者: 何元胜 童文杰 蔡永占 蔺忠龙 邓小鹏 郑元仙
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 烟草 NBS-LRR 抗病基因 同源序列 克隆
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 植物保护·农业气象
• 页码范围: 2138-2144
• 页数: 7页
• 分类号: S572
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2020.09.011

摘要

[目的]克隆并分析烟草NBS-LRR类抗病基因的同源序列(RGAs),为采用同源克隆技术挖掘烟草抗病基因提供理论参考.[方法]从基于NBS-LRR类抗病基因保守序列设计的简并引物中筛选扩增效果较好的引物用于扩增烟草RGAs,采用DNAMAN 6.0翻译成氨基酸序列,并与已知的其他植物抗病基因进行聚类分析.[结果]克隆获得6条与参比抗病基因具有高度同源性的烟草RGAs,大小在500 bp左右,但仅有4条RGAs具有连续的开放阅读框(ORF)及编码NBS功能结构域的核苷酸序列,命名为TRGA-87-1～TRGA-87-4.这4个烟草RGAs编码的氨基酸序列均含有NBS类抗病蛋白的多个典型保守基序,与已知的多种植物抗病基因编码的氨基酸序列均具有较高的相似性,其中,与烟草相关抗病基因编码的氨基酸序列相似性最高,为97.00％～100.00％,与其他植物的抗病基因编码氨基酸序列相似性为29.00％～53.00％,这些序列可分为3个亚类,其中TRGA-87-2与烟草N和亚麻L6聚为一类(TRGAⅠ),属于TIR-NBS-LRR类;TRGA-87-3和TRGA-87-4与水稻Xa-1和番茄Mi聚为一类(TRGAⅡ),属于non-TIR-NBS-LRR类,TRGA-87-1与拟南芥RPM1聚成一类(TRGAⅢ),属于non-TIR-NBS-LRR类.[结论]同源扩增技术可用于烟草中抗病基因的克隆、功能分析及定位等研究.