北柴胡转录因子BcbZIP179的基因克隆及原核表达

• 作者: 韩文静 徐娇 朱楚然 隋春 魏建和
• 来源期刊: 世界科学技术-中医药现代化
• 关键词: 北柴胡 BcbZIP179 基因克隆 表达分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 专题讨论一:中药研究|Thematic Dicussion Ⅰ:Chinese Materia Medica
• 页码范围: 3116-3121
• 页数: 6页
• 分类号: R282.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.11842/wst.20191222002

摘要

目的 克隆北柴胡转录因子基因BcbZIP179的全长编码序列,原核表达融合蛋白.为进一步研究该基因在北柴胡转录调控中的功能提供理论依据.方法 以北柴胡转录组数据为基础,设计特异性引物,PCR扩增BcbZIP179基因的全长编码序列,利用生物信息学分析软件分析序列特征.利用qPCR方法分析BcbZIP179基因在不同组织器官中的表达及MeJA处理条件下的表达情况.构建原核表达载体,在不同温度和IPTG浓度下,采用2种菌株诱导表达目的蛋白.结果 BcbZIP179编码序列全长432 bp,编码144个氨基酸,BcbZIP179受MeJA诱导,在MeJA处理的北柴胡不定根中,处理前24 h内,表达量逐渐升高,随后表达量降低;BcbZIP179在北柴胡的根、茎、叶、花及果实中均有表达,在果实中的表达量最高;利用大肠杆菌原核表达系统,在16℃和37℃不同温度条件下均获得了带有6×His标签的BcbZIP179融合蛋白.结论 克隆到了北柴胡中的1个bZIP家族的转录因子基因BcbZIP179,在16℃、IPTG 0.05 mmol·L-1条件下,可获得体外表达的蛋白,为制备抗体、分离互作蛋白和调控靶基因进而研究其功能奠定基础.