高灵敏度黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及其在中药材酸枣仁污染快速检测中的应用

• 作者: 付延伟 张磊 杨美华 欧阳臻 王长健 秦家安 秦露 蒋佳伊 骆骄阳
• 来源期刊: 中国中药杂志
• 关键词: 黄曲霉毒素B1 单克隆抗体 ic-ELISA 酸枣仁
• 年，卷（期）: 2020,（16）
• 所属期刊栏目: 化学
• 页码范围: 3900-3907
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.19540/j.cnki.cjcmm.20200522.201

摘要

该研究制备了一种高灵敏度的黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)单克隆抗体并基于该抗体建立间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competition enzyme-linked immunosorbent assay,ic-EHSA),用于中药材中AFB1污染的高通量、快速筛查,以保障中药用药安全性.研究中以改进的肟化法修饰AFB1后,用EDC-NHS法偶联载体蛋白获得AFB1完全抗原,更加简便且减少环境污染.并利用加大免疫剂量、多种方式注射等对Balb/c雌鼠进行免疫,最终制备得AFB1单克隆抗体.通过对其免疫特性进行鉴定,结果显示该AFB1单克隆抗体属于IgG2b型免疫球蛋白,其灵敏度(IC50)可达0.15 μg·L-1,亲和力为2.81×l08L·mol-1,与AFB2,AFG1和AFG2交叉反应率分别为35.07％,8.75％,1.15％,且与其他类真菌毒素几乎不存在交叉反应.基于该高灵敏度、高特异性抗体建立了ie-ELISA法,并用于中药材酸枣仁样品的检测.采用基质匹配的标准曲线进行计算,AFB1在0.05～0.58 μg·L-1线性良好(R2=0.992),加样回收率为88.00％～119.0％,检测限为1.69 μg·kg-1.采用所建立的方法测定了33批酸枣仁样品中AFB1的污染情况,其污染水平为3.62～206.58 μg·kg-1,其检测结果与UHPLC-MS/MS测定结果的线性相关系数为0.996,并且无假阳性和假阴性情况,表明所建立的ic-ELISA准确、可靠,可为中药材酸枣仁中AFB1污染的快筛提供一种简便、有效的技术手段,同时可为其他中药中AFB1的检测与监控提供参考.