Comamonas testosteroni 5-MGAM-4D来源的腈水合酶基因重组菌对腈类化合物的全细胞催化活性

• 作者: 刘胜先 崔宝程 杜文静 王黎 郭神 黄姣
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 睾丸酮丛毛单胞菌5-MGAM-4D 基因重组 腈水合酶 全细胞催化
• 年，卷（期）: 2020,（24）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 94-99
• 页数: 6页
• 分类号: TS201.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2020030127

摘要

目的:通过基因工程方法获得高效表达腈水合酶的基因工程菌CtNHase,探究其对腈类物质的全细胞催化作用,并考察pH、温度对全细胞催化反应的影响.方法:对来源Comamonas testosteroni 5-MGAM-4D的腈水合酶基因进行PCR扩增,以pET-24a为载体,构建基因重组表达质粒后,转化大肠杆菌感受态细胞进行SDS-PAGE蛋白表达验证,并通过色谱检测分析对底物丙烯腈和己二腈的转化情况.结果:在pH=7.4,30℃条件下,基因重组菌CtNHase催化活性最高,可通过全细胞催化在5 min内完全转化50 mmol/L己二腈生成己二酰二胺,在5h内完全转化500 mmol/L丙烯腈生成丙烯酰胺.结论:基因重组菌CtNHase可高效催化丙烯腈和己二腈生成丙烯酰胺和己二酰二胺,具有潜在的工业应用价值.