单域抗体T7噬菌体展示文库构建与鉴定

• 作者: 徐海 王健 郭长明 董洪燕 邓碧华 侯继波
• 来源期刊: 浙江农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 羊驼 纳米抗体 T7噬菌体 表面展示
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 27-33
• 页数: 7页
• 分类号: Q939.48
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-1524.2021.01.04

摘要

优化噬菌体展示文库构建策略,获得高品质羊驼源天然纳米抗体T7噬菌体展示文库,并对文库质量进行鉴定.分离羊驼外周血淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR扩增羊驼重链抗体可变区(VHH)基因,插入T7 select 415-1b噬菌体载体构建文库,计算文库的库容量,测定文库传代稳定性.测序分析VHH基因的多样性和纳米抗体氨基酸序列特征.Western-blot检测纳米抗体在噬菌体表面的表达情况,电镜观察文库中重组噬菌体颗粒形态.结果表明,构建羊驼源纳米抗体T7噬菌体展示文库,有效库容达到2.73×109 PFU;纳米抗体与羊驼源抗体同源性高,氨基酸序列显示纳米抗体特征区域,并其在噬菌体表面高拷贝表达;重组噬菌体颗粒结构完整,但随着传代出现插入基因的丢失.