奶牛胎盘还原性多肽不同蛋白酶酶解方法建立与优化

• 作者: 沈留红 张钺 尤留超 朱颍琨 石湉 董可 曹随忠
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 木瓜蛋白酶 胃蛋白酶 奶牛 胎盘 多肽
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 54-63
• 页数: 10页
• 分类号: S852.5
• 语种: 中文

摘要

为高效制备奶牛胎盘还原性多肽,试验选择自然分娩脱落健康中国荷斯坦奶牛新鲜胎盘,冰浴条件下12000 r·min-1匀浆化,分别采用木瓜蛋白酶和胃蛋白酶酶解,以奶牛胎盘组织匀浆为底物,基于Box-Behenken中心响应法,在底物浓度10％、30％、50％,酶底比1％、3％、5％,酶解时间3、5、7 h条件下制备胎盘多肽,使用普鲁士蓝法以维生素C为标准曲线检测其还原力.分析各因素对提取率和还原力影响及二者间相关性,采用响应面回归分析具有最高提取率和还原力提取方法,并加以验证.基于结果,以每克胎盘提取多肽具有的还原能力作为综合提取率(μg·g-1)通过响应面法进一步优化酶解条件.结果表明,①木瓜蛋白酶和胃蛋白酶分别在反应时间为6.18、6.22 h,底物浓度34.78％、30.71％,酶底比5.00％、3.18％时理论提取率最高,分别为6.97％和6.14％.在反应时间为3.95、4.83 h,底物浓度22.04％、35.82％,酶底比3.64％、3.57％时理论VitC当量最高,分别为70.54和58.59μg·mg-1.两种酶制备的奶牛胎盘多肽提取率与还原力均无显著相关性(P>0.05);②经综合提取率优化,最佳反应条件分别为反应时间4.70、5.49 h,底物浓度34.03％、35.74％,酶底比3.66％、3.92％,此时理论综合提取率分别为4414.09、3490.41μg·g-1.综上所述,奶牛胎盘组织蛋白可被木瓜蛋白酶和胃蛋白酶水解为还原性多肽;木瓜蛋白酶酶解效果优于胃蛋白酶;最佳反应条件分别为反应时间4.70、5.49 h,底物浓度34.03％、35.74％,酶底比3.66％、3.92％.