鸡宿主限制因子SAMHD1实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 李建梅 周生 张斌 姜逸 徐步 高明燕 俞燕
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡 宿主限制因子 SAMHD1 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 71-79
• 页数: 9页
• 分类号: S852.42
• 语种: 中文

摘要

为建立一种快速检测chSAMHD1表达量的方法,本研究以SPF鸡外周血单个核细胞总cDNA为模板,构建了包含chSAMHD1全长CDS的重组质粒pMD-chSAMHD1.跨chSAMHD1内含子设计1对荧光定量PCR特异性引物,以构建的重组质粒作为标准品,建立chSAMHD1实时荧光定量PCR检测方法,并对其敏感性、特异性及重复性进行验证,将其应用于1日龄SPF鸡组织chSAMHD1表达量的检测.结果显示:用建立的实时荧光定量PCR方法对5×108～5×104拷贝/μL的标准质粒进行检测,所得标准曲线呈现良好的线性关系;最低检测限为50拷贝/μL,灵敏度是普通PCR的100倍;特异性良好,仅能检测到鸡源细胞中SAMHD1基因;重复性好,组内和组间变异系数均小于2％;应用该方法检测1日龄正常SPF鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、神经、胸腺、法氏囊、十二指肠、腿肌、腺胃等组织的chSAMHD1基因拷贝数,结果显示chSAMHD1具有广泛的组织分布性.本研究为chSAMHD1功能研究提供了一种准确、有效的检测手段.