牛源多杀性巴氏杆菌PlpE蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 乌吉斯古楞 任旭荣 关平原 刘泽 刘重阳 宋庆庆 张智 权璞宏
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 多杀性巴氏杆菌 原核表达 PlpE基因 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 94-99
• 页数: 6页
• 分类号: S855.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2021.01.019

摘要

为体外表达牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)PlpE基因及制备抗PlpE蛋白多克隆抗体,根据PlpE基因核酸序列设计了1对特异性引物,通过PCR扩增PlpE基因,构建重组质粒pET-32a-PlpE;摇菌提取质粒,进行双酶切鉴定,鉴定正确后将重组质粒pET-32a-PlpE转化至BL21(DE3)感受态细胞,加入IPTG进行诱导,对诱导蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定;使用纯化蛋白PlpE免疫北京大耳白兔,制备多克隆抗体,并进行间接ELISA和Western Blot分析.结果显示,扩增的PlpE基因大小为1050 bp,在原核细胞中诱导表达的PlpE蛋白约56 kDa.间接ELISA结果显示,所制备多克隆抗体效价可达1:512000;Western Blot结果显示,所制备多克隆抗体反应性良好.PlpE蛋白的成功表达和多克隆抗体的成功制备,为下一步多杀性巴氏杆菌诊断方法的建立和疫苗研发奠定了基础.