微滴式数字聚合酶链式反应定量检测食品中金黄色葡萄球菌方法的研究

• 作者: 李丹 徐蕾蕊 魏海燕 魏咏新 马丹 汪琦 张西萌 张峰 曾静
• 来源期刊: 中国食品卫生杂志
• 关键词: 微滴式数字PCR 金黄色葡萄球菌 定量检测
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 实验技术与方法|Experimental Technique and Method
• 页码范围: 284-290
• 页数: 7页
• 分类号: R155
• 语种: 中文
• DOI: 10.13590/j.cjfh.2021.03.008

摘要

目的 建立微滴数字聚合酶链式反应(ddPCR)快速定量检测食品中金黄色葡萄球菌的方法.方法 以金黄色葡萄球菌nu基因为靶序列,筛选出同时适用于实时荧光定量PCR(qPCR)和微滴数字PCR(ddPCR)的引物探针,建立食品中金黄色葡萄球菌ddPCR快速定量检测方法,并对该方法进行特异性、灵敏度、准确性和重复性实验.结果 梯度稀释金黄色葡萄球菌纯培养液,确定ddPCR方法的检出限(LOD)和定量限(LOQ)均为110 CFU/mL;通过人工添加实验,同时进行ddPCR与平板计数检测,LOQ可达1000 CFU/g,且4个添加水平的检测结果偏差最大为4.77％,5个平行重复的检测变异系数均小于20％,展现出良好的准确性和重复性.结论 本研究建立的金黄色葡萄球菌ddPCR定量检测方法特异性好、灵敏度高、结果准确,为快速定量检测金黄色葡萄球菌提供了参考.