人肺癌细胞A549λ噬菌体cDNA文库的构建与鉴定

• 作者: 张红英 郭嘉雯 员月明 徐志勇 邓长生 王琪
• 来源期刊: 西南医科大学学报
• 关键词: 肺癌 λ噬菌体 cDNA文库 SMART
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 333-337
• 页数: 5页
• 分类号: G312
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2096-3351.2021.04.005

摘要

目的 构建人肺癌细胞A549λ 噬菌体cDNA文库,为抗肺癌药物的筛选和药物作用分子机理的研究奠定基础.方法 提取人肺癌细胞A549λ 总RNA,用Dnase I处理后,采用RNA 5'末端移动反转录(switching mechanism at 5′end of RNA transcript,SMART)技术合成双链cDNA,切胶回收去除短片段,依次用蛋白酶K和SfiⅠ进行酶切,并与经过酶切的λTri-plEx2载体连接后进行体外包装,得到初级文库.初级文库扩增后,测定扩增文库滴度,并通过PCR鉴定插入片段.结果 构建的人肺癌细胞A549λ 噬菌体初级文库库容为1.88×107 pfu/mL,扩增文库滴度为2.50×109 pfu/mL,插入cDNA片段为500～3000 bp.结论 成功构建了人肺癌细胞A549λ 噬菌体cDNA文库,为进一步筛选治疗肺癌的药物作用分子机理奠定了基础.