花生类受体蛋白激酶基因AhBAK1的克隆及原核表达

• 作者: 韦莉 李霞 黄舒婷 Chanthaphoone KEOVONGKOD 何龙飞 詹洁 王爱勤 肖冬
• 来源期刊: 广西植物
• 关键词: 花生 AhBAK1 基因克隆 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 生理与分子生物学|Physiology and Molecular Biology
• 页码范围: 573-583
• 页数: 11页
• 分类号: Q943
• 语种: 中文
• DOI: 10.11931/guihaia.gxzw201906029

摘要

BAK1是富含亮氨酸重复序列型类受体蛋白激酶,参与调控植物先天免疫反应过程中的程序性细胞死亡过程.实验室已有的花生铝胁迫转录组数据揭示AhBAK1为铝胁迫响应基因.为研究其在花生抗铝机制中的作用,该文分析了铝胁迫下AhBAK1在花生耐铝品种'99-1507'和铝敏感品种'中花2号'('ZH2')根尖中的转录变化,采用RT-PCR技术进行扩增AhBAK1的完整CDS序列,并对序列特征进行了分析.结果表明:AhBAK1显著响应铝处理,且在'99-1507'中有着更强的诱导表达;AhBAK1包括625个氨基酸残基,属富亮氨酸重复区类受体激酶,具跨膜域和蛋白激酶催化结构域,不存在信号肽,预测定位于细胞质膜;我们进一步构建了含有AhBAK1激酶域的pGEX-6p-1-AhBAK1-CD重组质粒,体外诱导表达出约70 kD可溶性蛋白,经凝胶亲和层析纯化,最终得到基于蛋白印迹实验(Western Blot)验证正确的重组蛋白.为进一步研究AhBAK1的生物学功能和生化功能奠定了基础.