Ddit43'UTR双荧光素酶报告基因质粒的构建及调控microRNA的鉴定

• 作者: 孙雨晴 王宇飞 宋美燕 张娟 张丽 李美宁 白云 刘志贞
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: miR-222-3p Ddit4基因 3’UTR 双荧光素酶报告载体
• 年，卷（期）: 2021,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1437-1442
• 页数: 6页
• 分类号: R34
• 语种: 中文

摘要

目的 构建Ddit4基因双荧光素酶报告基因质粒,并验证miR-222-3p与Ddit4的靶向调控关系.方法 利用生物信息学软件预测miR-222-3p与Ddit4的结合位点;PCR扩增Ddit43'UTR序列,将其克隆至双荧光素酶GP-miRGLO报告基因载体中,同时构建Ddit43'UTR突变载体;将miR-222-3p、双荧光素酶报告质粒野生型和突变型mmu-Ddit43'UTR共转染至HT-22细胞中,酶标仪检测双荧光素酶荧光值.结果 生物信息数据库预测结果显示,miR-222-3p与Ddit4基因3'UTR存在互补结合位点,载体测序证实双荧光素酶Ddit4报告载体构建成功;双荧光素酶试验表明,miR-222-3p mimics能够与野生型Ddit4基因3'UTR靶向结合并降低其荧光值,将靶位点进行突变后,其荧光值有所上升.结论 miR-222-3p与Ddit4基因3'UTR互补结合实现了其对Ddit4靶向调控的作用;miR-222-3p可能通过调控Ddit4进而参与NTDs的发生发展.