白介素-1受体1胞外域的原核表达及鉴定

• 作者: 周永飞 韩顺子 赵丹莹 张健锋 常军亮 刘玉林 曹玉锋 刘景会
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白介素-1受体1 胞外域 原核表达 纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2021,（12）
• 所属期刊栏目: 治疗制剂
• 页码范围: 1443-1448
• 页数: 6页
• 分类号: R373.2+3|Q75
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达白介素-1受体1(interleukin-1 receptor 1,IL-1R1)胞外域,并进行鉴定.方法 从A375·S2细胞中扩增IL-1R1胞外域基因片段,克隆至载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-IL-1R1,转化入感受态OverExpress(DE3),经IPTG诱导表达,并进行亲和层析纯化.将纯化产物与弗氏佐剂充分乳化,免疫小鼠,分离血清,ELISA法检测血清抗体效价,Western blot和间接免疫荧光法检测抗体结合活性.结果 菌落PCR及测序结果证明,重组表达质粒pET-28a-IL-1R1构建正确.表达产物的相对分子质量约34000,表达量为18％,纯化后纯度达93％,且可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合.免疫小鼠血清效价约达1:100000,且可与重组IL-1R1蛋白及A375·S2细胞中受体蛋白发生特异性结合.结论 成功原核表达了IL-1R1胞外域,且免疫小鼠后可产生IL-1R1特异性抗体,本实验为后续IL-1R1单克隆抗体的制备及细胞受体功能的研究奠定了基础.