致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌分离鉴定及三重PCR检测方法的建立

• 作者: 张楠驰 苟小兰 王利
• 来源期刊: 食品工业科技
• 关键词: 小肠结肠炎耶尔森氏菌 毒力基因 快速检测 多重PCR
• 年，卷（期）: 2021,（7）
• 所属期刊栏目: 生物工程|Bioengineering
• 页码范围: 95-101
• 页数: 7页
• 分类号: TS254.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2020050227

摘要

为鉴定导致患病鲫鱼肛门红肿、腹部有出血点症状的病原菌,并建立一种快速检测该病原菌的方法.本研究从患病鲫鱼中分离了病原菌,采用形态学、理化特性分析及16SrDNA序列分析方法鉴定菌株.采用PCR扩增法检测该菌毒力基因,琼脂纸片扩散法检测该菌株的耐药性,致病性能验证试验检测其致病性.针对该菌ail基因、inv基因和intB 基因设计了 3条特异性引物,通过对反应体系和条件的优化,建立了一种检测该菌的三重PCR方法并初步应用于患病鲫鱼样品的检测中.结果显示,从患病鲫鱼心脏组织中分离了一株小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica),命名为fsznc-10.检测到该菌携带ail、ystB、virF、intB毒力基因,该菌对诺氟沙星、庆大霉素等5种抗生素敏感,对鲫鱼具有一定的致病性.三重PCR方法可准确扩增出小肠结肠炎耶尔森氏菌ail、inv和intB三个目的基因,而其他菌株均未扩增出目的基因.该方法检测该菌DNA最低检出量为1.704×10-6ng/μL,检测患病鱼心脏样品的阳性率约为86.67％,与16SrDNA序列分析方法的检测符合率为100％.本试验建立的三重PCR检测法具有特异性强、敏感性高、操作简单、成本低的优点.这为临床中小肠结肠炎耶尔森氏菌的防控和检测提供参考依据.