原核表达新型冠状病毒受体结合蛋白的制备及免疫原性研究

• 作者: 沈钱通 安彤 李思奇 张柯欣 杨宏宏 朱赟 陈刚 庄昉成 高孟
• 来源期刊: 国际流行病学传染病学杂志
• 关键词: 新型冠状病毒 受体结合蛋白 原核表达 免疫原性 复性折叠 免疫应答
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 病毒病研究·论著
• 页码范围: 6-11
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn331340-20211103-00210

摘要

目的:探索原核表达新型冠状病毒受体结合蛋白（RBD）的制备方法，并对其在小鼠体内的免疫原性进行评价。方法:用大肠埃希菌表达重组新型冠状病毒RBD，进行纯化、透析复性，比较了RBD复性前后的结构表征和抗原活性变化，最后将制备所得重组RBD免疫Babl/c小鼠，检测免疫小鼠体内的体液免疫和细胞免疫变化情况。结果:完成了大肠埃希菌表达的新型冠状病毒重组RBD的制备。复性前后，RBD的自发荧光波长发生蓝移现象，从（363.33±0.47）nm蓝移至（333.00±0.82）nm，蛋白形状从无序状态折叠为（9.55±0.39）nm的颗粒，复性后RBD与ACE-2的结合活性是复性前的128倍。活病毒中和抗体检测结果显示：血清对原型株的滴度几何平均数为136.70，对贝塔株为101.59，两者无统计学差异( t=0.41， P=0.700)。试验组小鼠脾淋巴细胞产生的分泌特异性IFN-γ的效应T细胞为(308.50±144.11)个斑点形成细胞/5×10 5个细胞，低于对照组[(3.75±3.11)个斑点形成细胞/5×10 5个细胞]，差异有统计学差异( t=4.72， P=0.010)。 结论:成功制备原核表达的新型冠状病毒重组RBD，通过体外复性折叠，能够产生良好、全面的免疫原性。