利用慢病毒包装小窝蛋白-1过表达稳定细胞株的构建

• 作者: 刘杨 许淑娟 李琼毅 刘翊忠
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 小窝蛋白-1 慢病毒 仓鼠肾细胞BHK-21 细胞株 稳定性
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 164-169
• 页数: 6页
• 分类号: R392
• 语种: 中文

摘要

目的 利用慢病毒包装构建过表达小窝蛋白-1(Caveolin-1)的稳定细胞株.方法 PCR扩增仓鼠肾细胞BHK-21中Caveolin-1基因,克隆至pTRIP-CMV载体中,构建重组表达质粒pTRIP-Cav1,将其与对照质粒pTRIP-EGFP分别经Lipofectamine? 2000介导转染HEK-293T细胞,收集包装的慢病毒并转导至BHK-21细胞,构建过表达Caveolin-1的细胞株BHK-Cav1及过表达绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的对照细胞株BHK-EGFP.Western blot、qRT-PCR、免疫荧光法验证细胞株的稳定性及过表达特性,同时检测细胞活力.结果 经双酶切及测序鉴定,重组表达质粒pTRIP-Cav1构建正确.与BHK-21细胞比较,各代次BHK-EGFP细胞中EGFP荧光明显,BHK-Cav1细胞中Caveolin-1蛋白表达水平增加,mRNA水平显著增加(P＜0.01),且表达水平不随细胞代次的增长而改变.BHK-Cav1和BHK-EGFP细胞活力与BHK-21细胞比较,差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 成功构建了Caveolin-1过表达细胞株BHK-Cav1,其具有较好的稳定性,为下一步研究病毒通过Caveolin依赖型内吞途径感染BHK-21细胞奠定了基础.