猪瘟病毒Erns和E2蛋白重组表达及抗体间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 张洪亮 郝占武 林喜平 张志 王凤雪 解倩倩 韩先杰 单虎 温永俊
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 Erns基因 E2基因 蛋白表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文|Research articles
• 页码范围: 76-83
• 页数: 8页
• 分类号: S852.651
• 语种: 中文

摘要

本研究将CSFV Erns和E2基因的主要抗原区进行克隆,构建pET32a-Erns和pET32aEK-E2重组质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达和纯化,以纯化的rErns、rE2重组蛋白为包被抗原,经条件优化,分别建立CSFV rErns和rE2抗体间接ELISA检测方法.SDS-PAGE结果显示,分别获得约为47 kDa和42 kDa的重组蛋白,rErns重组蛋白主要在上清液中存在,rE2重组蛋白主要以包涵体形式存在.Western blot结果显示,纯化后的重组蛋白具有良好的免疫原性.通过方阵试验进行了ELISA反应条件优化,确定了Erns蛋白最佳包被量为2.5μg/mL,rE2蛋白最佳包被量为0.625μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1:100,最佳封闭液为0.25％PVA溶液,HRP标记的兔抗猪IgG二抗最佳稀释度为1:2000,临界值分别为0.24和0.33.上述方法仅与CSFV阳性血清发生特异性反应,检测敏感性可达到1:1600,批内重复性和批间重复性变异系数均小于10％.本研究建立的间接ELISA方法可初步应用于CSFV Erns和E2抗体的检测,鉴别E2亚单位疫苗免疫抗体和野毒感染抗体,有利于猪瘟净化工作的实施.