重组人CK2β亚基的原核表达、纯化与鉴定

• 作者: 刘新光 梁念慈 马涧泉
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 人蛋白激酶CK2β亚基 表达载体pT7-7 原核表达 蛋白质纯化 酶动力学分析
• 年，卷（期）: 2000,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 201-205
• 页数: 5页
• 分类号: Q51|Q55|Q812
• 字数: 4809字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2000.02.024

摘要

将构建成功的人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的重组质粒, 转化大肠杆菌BL21 (DE3), 在IPTG诱导下表达. 表达蛋白大多数以不溶形式存在. 6L(约10.2 g)表达菌抽提得到约20 mg的可溶性表达产物, 通过P11磷酸纤维素一步层析分离, 得到6.8 mg纯化蛋白. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化的蛋白为一分子质量26 ku的单一蛋白带.蛋白质印迹结果证明:纯化的表达产物与抗人CK2β抗体可发生特异性免疫反应. CK2β亚基对CK2α有激活作用, 纯化的CK2α和β亚基在等摩尔混合时即可组成有最大生物活性的全酶. 实验结果有力地证明了克隆表达与纯化的重组蛋白是人蛋白激酶CK2β亚基.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁念慈	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	252	1946	22.0	32.0
2	马涧泉	中山医科大学生物化学教研室	15	106	6.0	10.0
3	刘新光	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	166	878	14.0	23.0