截短型HBsAg中蛋白反式激活基因的克隆

• 作者: 刘妍 张玲霞 张跃新 成军 李克 李莉 段惠娟 牟劲松 陈菊梅 韩萍
• 来源期刊: 中华传染病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,乙型 病毒蛋白质类 反式激活(遗传学) 抑制消减杂交 克隆,分子
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 218-221
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3392字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1000-6680.2002.04.007

摘要

目的应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒(HBV)截短型中蛋白(MHBst)反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HBV截短型中蛋白反式激活相关基因.方法以HBV截短型中蛋白表达质粒pcDNA3.1(-)-Mt167转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa I酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析. 结果成功构建人HBV截短型中蛋白反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后得到94个白色克隆,进行菌落PCR分析,均得到200～800 bp插入片段.挑取50个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得23种编码基因,包括19种已知基因和4种未知基因.结论筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、免疫应答及肿瘤发生密切相关的蛋白编码基因,因此可能是HBV截短型中蛋白反式激活靶基因.