γ-干扰素基因pIRES改进型黄色荧光蛋白载体的构建

• 作者: 刘海泉 卓业鸿 李艳艳 林明楷 王金林 葛坚 蓝育青
• 来源期刊: 中山医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 干扰素Ⅱ型/遗传学 黄色荧光蛋白 遗传载体 克隆,分子 序列分析,DNA
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 197-199
• 页数: 3页
• 分类号: R775.1
• 字数: 2214字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2002.03.011

摘要

[目的]构建携带γ-干扰素基因(ifn-γ)的pIRES改进型黄色荧光蛋白载体(pIRES-EYFPIFN-γ),为γ-干扰素基因的体内外表达及蛋白定位提供理想的标记.[方法]根据已知γ-干扰素基因序列,设计在目的片段两端分别带EcoRⅤ和NotⅠ酶切位点序列的2条引物,用PCR技术从质粒pcDNA3IFN-γ中扩增出ifn-γ(499 bp),PCR产物用EcoRⅤ和NotⅠ双酶切后回收纯化,定向克隆至商品质粒pIRES-EYFP,重组质粒pIRES-EYFPIFN-γ用限制性内切酶酶切和DNA序列分析鉴定.同时以脂质体为介导,将pIRES-EYFPIFN-γ转染正常人眼Tenon囊成纤维细胞,48 h后于荧光倒置显微镜下观察基因的表达.[结果] DNA序列分析证明PCR产物为ifn-γ,将重组质粒转染正常人眼Tenon囊成纤维细胞,荧光倒置显微镜下可见黄色荧光蛋白的表达,转染率约为43%.[结论]成功构建pIRES-EYFPIFN-γ载体为利用黄色荧光蛋白标记在体内外进行γ-干扰素基因表达和蛋白定位奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王金林	中山医科大学中山眼科中心	4	19	3.0	4.0
2	刘海泉	中山医科大学中山眼科中心	6	66	4.0	6.0
3	林明楷	中山医科大学中山眼科中心	12	492	7.0	12.0
4	葛坚	中山医科大学中山眼科中心	36	950	14.0	30.0
5	卓业鸿	中山医科大学中山眼科中心	12	514	7.0	12.0
6	蓝育青	中山医科大学中山眼科中心	9	134	5.0	9.0
7	李艳艳	中山医科大学中山眼科中心	1	5	1.0	1.0