细菌内同源重组高效制备含绿色荧光蛋白和抗凋亡基因bcl-XL的重组腺病毒载体

• 作者: 刘双信 唐仕波 李湘 罗燕
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 同源重组 腺病毒 细胞凋亡 基因,bcl-XL 基因疗法
• 年，卷（期）: 2002,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1462-1467
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 字数: 5736字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2002.12.002

摘要

目的:制备含绿色荧光蛋白和抗凋亡基因bcl-XL的重组腺病毒载体.方法: 采用PCR方法从质粒pEGFP-C3-bcl-XL中扩增出bcl-XL基因,再亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成转移质粒pAdTrack-CMV-bcl-XL;然后与pAdEasy-1共转化BJ5183菌,采用细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdEasy-1-gfp-bcl-XL,筛选同源重组的阳性克隆;抽提的pAdEasy-1-gfp-bcl-XL经PacI线性化后,再用LIPOFECTAMINETM2000介导转染至人胚肾293细胞内包装扩增出重组腺病毒颗粒;采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定;用氯化铯超高速梯度离心纯化获取高滴度的重组腺病毒rAd-gfp-bcl-XL.结果: 由pAdTrack-CMV-bcl-XL和pAdEasy-1共转化BJ5183菌16-20 h后,可获得35%的阳性重组体细菌克隆.由重组质粒DNA经293细胞包装后产生的重组腺病毒,经PCR检测表明含有目的基因bcl-XL.氯化铯纯化所得重组腺病毒滴度约为6.5×1012PFU/L.结论: 用细菌内同源重组法可以高效、简便、快捷地制备出重组腺病毒质粒载体,重组体病毒质粒经293细胞包装、扩增和氯化铯纯化后可制备出高滴度的重组腺病毒颗粒rAd-gfp-bcl-XL,为人类相关疾病的基因治疗提供良好的基因转染载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐仕波	中山大学中山眼科中心玻璃体视网膜实验室	91	528	11.0	17.0
2	罗燕	中山大学中山眼科中心玻璃体视网膜实验室	34	313	10.0	16.0
3	刘双信	广东省人民医院肾内科	36	260	9.0	14.0
4	李湘	中山大学附属第一临床医院肝胆外科	15	36	4.0	5.0