编码绿色荧光蛋白和βARKct的重组腺病毒的制备

• 作者: 余细勇 单志新 林曙光 林秋雄 符永恒 谭虹虹 郑猛
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 同源重组 腺病毒 G蛋白
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 392-395,408
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3550字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2005.04.009

摘要

[目的]制备编码绿色荧光蛋白(GFP)和Gβγ活性抑制剂βARKct的重组腺病毒载体.[方法]构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-βARKct,经PmeI线性化后转化入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-I的BJ5183菌,筛选获得重组腺病毒质粒pAdEasy-gfp-βARKct.用LipoFectamine 2000将经PacI线性化的pAdEasy-gfp-βARKct转染入人胚肾293细胞,包装并扩增出重组腺病毒颗粒rAd-gfp-βARKct.用氯化铯高速梯度离心、纯化rAd-gfp-βARKct.用rAd-GFP-βARKct干预去甲肾上腺素诱导的乳鼠心肌细胞肥大过程,观察对β肌球蛋白重链(βMHC)基因表达的影响.[结果]将pAdTrack-CMV-βARKct转入含pAdEasy-I的BJ5183菌后获得20%的阳性重组体克隆.重组腺病毒质粒在293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒,经PCR鉴定含有βARKct编码基因.透析纯化得到重组腺病毒滴度为6.0×106 pfu/mL.rAd-GFP-βARKct表达的βARKct可抑制乳鼠心肌细胞βMHC的高表达.[结论]成功构建重组腺病毒载体,并在293细胞中包装、制备出可表达βARKct的重组腺病毒rAd-gfp-βARKct.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余细勇	广东省心血管病研究所冠心病研究重点实验室	51	389	9.0	18.0
2	符永恒	广东省心血管病研究所冠心病研究重点实验室	13	71	4.0	8.0
3	林秋雄	广东省心血管病研究所冠心病研究重点实验室	13	34	5.0	5.0
4	单志新	广东省心血管病研究所冠心病研究重点实验室	12	31	3.0	5.0
5	谭虹虹	广东省心血管病研究所冠心病研究重点实验室	4	14	2.0	3.0
6	郑猛	广东省心血管病研究所冠心病研究重点实验室	5	13	2.0	3.0