含绿色荧光蛋白报告基因pUC18筛选载体的构建

• 作者: 李付广 李倩如 杜英 王进
• 来源期刊: 郑州大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 绿色荧光蛋白 载体 pUC18
• 年，卷（期）: 2002,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 621-624
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 2396字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2002.05.029

摘要

目的:以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,将GFP基因克隆入pUC18建立大通量的筛选载体.方法:用PCR方法扩增目的DNA片段,碱裂解法小量制备质粒DNA,用限制性内切酶消化质粒DNA,用低熔点琼脂糖凝胶分离和纯化大片段DNA,GFP基因与pUC18连接,用氯化钙法转化感受态细胞,DNA序列测定,琼脂糖凝胶电泳,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳.结果:pUC18-atg-GFP载体意外表达GFP蛋白,新合成的上游引物与原下游引物扩增GFP基因,克隆入pUC18构建pUC18-GFP载体,通过PCR、酶切鉴定和DNA序列分析,GFP基因的读码框架与原设计方案完全一致,该载体自身无GFP表达.结论:筛选载体内的GFP基因与克隆基因的融合基因可表达一种融合蛋白,在琼脂平板上含有该融合基因的克隆在紫外线激发下可发绿色荧光,因此,可表达基因能被挑选出来.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜英	郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室	115	406	10.0	13.0
2	李倩如	郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室	46	185	8.0	11.0
3	李付广	郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室	45	132	7.0	9.0
4	王进	河南职工医学院微生物学与免疫学教研室	10	15	3.0	3.0