抗人结肠癌单抗MC5的功能性ScFv在大肠杆菌中的可溶性表达

• 作者: 何凤田 彭家和 李蓉芬 江渝 郑英如 钟小林 陈姗 高会广
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: ScFv抗体 结肠癌 噬菌体呈现 原核表达
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: R735.303
• 字数: 639字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8861.2003.01.001

摘要

目的制备抗人结肠癌单抗MC5的具功能活性的可溶性单链可变区片段(ScFv).方法从分泌MC5的杂交瘤细胞分离mRNA,RT-PCR分别扩增抗体质量、轻链可变区基因(VH和VL DNA),经linker DNA连接形成ScFv DNA.将ScFv DNA与噬粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,转化菌经辅助噬菌体M13KO7感染后,获得重组噬菌体.以高表达MC5结合抗原的人结肠癌细胞系SW480对重组噬菌体进行 2轮筛选后,经ELISA筛选呈现抗体ScFv片段的噬菌体单克隆.取2个强阳性克隆的噬菌体感染大肠杆菌HB2151,用于表达可溶性ScFv.经点印迹和Western印迹对可溶性ScFv进行鉴定,经ELISA检测可溶性ScFv的抗原结合活性.结竦玫腣H、VL和ScFv DNA分别约为340、320和750 bp.对重组噬菌体经2轮亲和筛选后,经ELISA从25个克隆中筛检出10个抗原阳性克隆.源于2个强阳性克隆的可溶性ScFv的分子质量为32 000 u,且浓集于细菌周质腔中,可溶性ScFv具有抗原结合活性,其结合位点与亲本单抗MC5相同.结论针对MC5的具功能活性的可溶性ScFv的成功制备,为人结肠癌的体外(乃至体内)研究提供了新的靶向载体分子.