TLR4胞外段在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及鉴定

• 作者: 张道杰 朱佩芳 杨清武 段朝霞 蒋建新 陈永华
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: TLR4 融合蛋白 可溶性表达 纯化
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 274-277
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3539字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8861.2003.04.008

摘要

目的构建谷胱甘肽转硫酶-TLR4融合蛋白表达载体,并研究其编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达.方法利用PCR从含TLR4全长cDNA序列的质粒中扩增其胞外段,约1 800 bp,然后将其克隆入pMD18-T载体中.测序确证后重组入谷胱甘肽转硫酶融合表达载体pGEX-4T-1中,并用IPTG诱导其在大肠杆菌中表达.结果 PCR扩增的TLR4胞外区基因序列与GenBank数据库中的序列一致.重组质粒经酶切鉴定及测序证实,TLR4基因已正确插入到pGEX-4T-1中.重组表达质粒转化感受态大肠杆菌HB101后用IPTG诱导,获得Mr 92 000的GST-TLR4融合蛋白;37 ℃,0.2 mmol/L IPTG诱导4 h,SDS-PAGE电泳后,经薄层凝胶扫描分析该融合蛋白占菌体蛋白总量34.25%,部分以包涵体存在,可溶性蛋白约占27.84%;亲和层析纯化后纯度大于90%.Western-blot证实GST-TLR4融合蛋白能与TLR4单抗特异性结合.结论成功地构建融合蛋白表达载体pGEX-TLR4,并在大肠杆菌中获得有效表达,获得了纯度大于90%的可溶性GST-TLR4融合蛋白,为进一步研究其功能及制备TLR4单克隆抗体奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒋建新	第三军医大学大坪医院野战外科研究所四室	76	736	15.0	24.0
2	朱佩芳	第三军医大学大坪医院野战外科研究所四室	145	1960	24.0	37.0
3	张道杰	第三军医大学大坪医院野战外科研究所四室	3	17	3.0	3.0
4	杨清武	第三军医大学大坪医院野战外科研究所四室	57	324	9.0	14.0
5	陈永华	第三军医大学大坪医院野战外科研究所四室	20	204	7.0	14.0
6	段朝霞	第三军医大学大坪医院野战外科研究所四室	8	48	4.0	6.0