TUB2基因重组质粒的构建、鉴定及其在毛壳菌中的转化

• 作者: 杨谦 迟玉杰
• 来源期刊: 高技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 抗苯并咪唑类基因 质粒 构建 鉴定 转化
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 生物与现代农业技术
• 页码范围: 34-40
• 页数: 7页
• 分类号: Q93
• 字数: 4186字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-0470.2003.02.008

摘要

根据苯并咪唑类杀菌剂抗性基因的核酸序列,在其阅读框架外的上、下游设计一对特异性引物,并在其5′-端分别加上PstI位点.以pRB129质粒为模板,PCR扩增得到一条长约1.4kb的片段,经酶切鉴定证明是TUB2基因.将此PCR产物经消化后与同样酶切的pTA质粒连接,构建出pTA-TUB2质粒并转化大肠杆菌.再以pTA-TUB2质粒为模板,PCR扩增该目的基因,通过对其核苷酸序列分析证明构建的质粒是含TUB2基因的pTA-TUB2质粒.利用PEG方法,将该质粒转化毛壳菌,使得对多菌灵非常敏感的毛壳菌能够在300μg/ml多菌灵的培养基上正常生长,其抗药性提高300倍以上,且转化稳定性试验表明,其抗药性在非选择性培养基上连续培养10代保持不变.结果表明质粒pTA-TUB2对毛壳菌的转化率为27/(2×105).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨谦	哈尔滨工业大学生命科学与工程系	191	3458	29.0	49.0
2	迟玉杰	哈尔滨工业大学生命科学与工程系	5	159	5.0	5.0