鸡γ-干扰素cDNA的克隆和在大肠杆菌中的温度诱导型表达

• 作者: 张勤 张沅 杨国庆 郭英 陈永福 高山
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 鸡γ-干扰素基因 PCR 真核表达 RT-PCR 原核表达
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 394-398
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 5059字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2003.04.013

摘要

克隆了鸡(Gallus gallus)的γ-干扰素cDNA,并用大肠杆菌(Escherichia coli)进行了温度诱导型表达.用PCR方法扩增了鸡γ-干扰素基因组基因,将其克隆到载体pGEM-T上.对重组载体的插入片段进行酶切分析和部分序列测定:证明了基因的正确性;克隆的鸡γ-干扰素基因的编码序列中存在一个点突变(G→A),这一突变导致一个三联体密码子GAA变为AAA,编码的氨基酸由谷氨酸(Glu)变为赖氨酸(Lys).用鸡γ-干扰素基因组基因构建了真核表达载体pCI-ChIFN.将这一真核表达载体转染兔成纤维细胞的细胞系中进行表达实验:提取转染后细胞裂解物中的RNA,再以此为模板进行RT-PCR,获得了完整的鸡γ-干扰素cDNA基因,同时证明鸡γ-干扰素基因组基因能在兔成纤维细胞系中表达.用鸡γ-干扰素cDNA构建了温度诱导型原核表达载体pBVcDNA,并将其转导到大肠杆菌DH5 α中,经细菌发酵和温度诱导,表达了一个18 kD的特异蛋白,其表达量占细菌总蛋白的8.75%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈永福	中国农业大学农业生物技术国家重点实验室	147	1482	21.0	31.0
2	张勤	中国农业大学动物科技学院	89	1003	18.0	29.0
3	张沅	中国农业大学动物科技学院	110	1282	19.0	28.0
4	杨国庆	中国农业大学农业生物技术国家重点实验室	9	133	5.0	9.0
5	郭英	中国农业大学农业生物技术国家重点实验室	13	75	5.0	8.0
6	高山	中国农业大学农业生物技术国家重点实验室	4	89	3.0	4.0