基因重组幽门螺杆菌HspA-Zot融合蛋白质口服疫苗的研制

• 作者: 何志勇 吴祥甫 李明峰 熊伟民 程军
• 来源期刊: 中华腹部疾病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 热休克蛋白A亚单位 霍乱弧菌封闭小带毒素 融合蛋白质 口服疫苗 免疫应答
• 年，卷（期）: 2003,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 547-551,562
• 页数: 6页
• 分类号: R378.2
• 语种: 中文

摘要

目的制备幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位(HspA)和霍乱弧菌封闭小带毒素(Zot)的重组融合蛋白质HspA-Zot(HZ);观察融合蛋白HZ经口服免疫后在小鼠小肠内的吸收情况;观察HZ经口服免疫后诱发小鼠产生的特异性免疫应答反应.方法①用PCR方法扩增HspA和Zot两个目的基因片段,将它们分别克隆至pSK(+)质粒上,然后插入含T7启动子pET-28a(+)的表达载体中,构建含双基因的表达质粒pET-hz,转化E,coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达高效的融合蛋白HZ;②融合蛋白经镍离子柱纯化、复性后,与HspA重组蛋白质共同标记同位素125I,经小鼠灌胃实验观察其在小鼠小肠内的吸收情况.结果①经测序,hspA-zot(hz)融合基因片段由1 575bp组成,为编码515个氨基酸残基的多肽.经SDS-PAGE检测发现,融合基因表达的蛋白质相对分子质量(M)r约为65×103.②标记同位素125I的HZ和HspA,经小鼠灌胃实验观察不同时间段的吸收情况,结果发现在5～10min时间段,HZ组出现吸收峰值,约为对照组的8.65倍(P＜0.001),且吸收峰值时间明显提前.结论融合蛋白质HZ经口服后可以在小鼠小肠内迅速被大量吸收,经口服免疫后可以刺激机体产生较高滴度特异性抗体.HZ可以作为预防和治疗幽门螺杆菌感染的候选口服疫苗株.