抗人肝癌基因工程嵌合Fab抗体的原核表达及复性

• 作者: 姚西英 宋斐 杨向民 邢金良 陈志南
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝癌 嵌合Fab 原核表达 复性
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 189-193
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 4774字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2004.03.009

摘要

目的分别在大肠杆菌中高效表达嵌合Fd及嵌合轻链,并进行嵌合Fab复性的研究. 方法分别将嵌合Fd及嵌合轻链基因插入到原核表达载体pET32a中,构建成重组载体pET32a/cFd和pET32a/cL.转化大肠杆菌后诱导其表达.大量制备表达的嵌合Fd 及嵌合轻链后,按二者绝对量等摩尔比混合后进行透析复性.然后,分别利用SDS-PAGE、Western blot和ELISA进行分析和鉴定. 结果成功获得了嵌合Fd及嵌合轻链的原核非融合高效表达,表达蛋白相对分子质量(Mr)均在24×103左右.表达量分别约占菌体总蛋白的28.3%和32.3%,2种目的蛋白均主要以不溶性的包涵体形式存在.另外,嵌合Fd与嵌合轻链在缓慢透析的条件下成功地复性为嵌合Fab抗体,Mr约为42×103,具有特异性抗原结合活性和良好的亲和力.在起始总蛋白浓度为100μg/ml时,复性效率约为49%. 结论成功实现了嵌合Fab抗体的高效表达及高效复性,为进一步探讨其在肝癌治疗中的应用奠定了基础.