大肠杆菌-分枝杆菌分泌型穿梭表达质粒pBCG-SP-HSP65的构建及人结核杆菌HSP65的表达

• 作者: 戴五星 梁靓 皇甫永穆 程继忠 陈智浩 高红 黄海浪
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 医学
• 关键词: 信号肽 结核杆菌HSP65 分泌型原核穿梭表达质粒 重组耻垢分枝杆菌
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 170-174
• 页数: 5页
• 分类号: R378.91
• 字数: 4096字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2004.02.004

摘要

用PCR技术从Bacillus Calmette-guérin(BCG)基因组中扩增出抗原85B(Ag85B)的信号肽(SP)DNA序列,从pCMVMTHSP65质粒中扩增出人结核杆菌HSP65全长基因.利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒pBCG-2100的人结核杆菌HSP70启动子下游,构建成分泌型原核穿梭表达质粒(pBCG-SP-HSP65).酶切鉴定、PCR和测序分析结果均表明分泌型原核穿梭表达质粒pBCG-SP-HSP65构建成功.利用电穿孔将该质粒转入耻垢分枝杆菌(Mycobacterial smegmatis, MS)中,用卡那霉素筛选出阳性重组子.经热诱导后用SDS-PAGE观察到在耻垢分枝杆菌中65kD蛋白占总蛋白的20%,而在重组耻垢分枝杆菌表达的65kD蛋白占菌体总蛋白的34.46%,占裂解物上清总蛋白的68.56%,表明重组的HSP65基因能在耻垢分枝杆菌中高效表达,表达的蛋白大部分以可溶状态存在.通过Western-blot证实分泌的该蛋白能与结核杆菌HSP65的抗体特异性结合,说明该重组蛋白具有HSP65的生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁靓	华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系	2	10	2.0	2.0
2	戴五星	华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系	6	8	2.0	2.0
3	高红	华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系	11	48	5.0	6.0
4	陈智浩	华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系	2	3	1.0	1.0
5	黄海浪	华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系	6	14	3.0	3.0
6	程继忠	华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系	1	3	1.0	1.0