甘薯β-淀粉酶cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 张义正 张勇为
• 来源期刊: 高技术通讯
• 关键词: 甘薯 β-淀粉酶 cDNA克隆 表达
• 年，卷（期）: 2004,（9）
• 所属期刊栏目: 生物与现代农业技术
• 页码范围: 29-33
• 页数: 5页
• 字数: 4628字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-0470.2004.09.007

摘要

利用RT-PCR技术从甘薯新大紫(Ipomoea batatas Lam cv. Xindazi)块根总RNA中扩增出预期大小的DNA片段(约1.5kb).将该片段克隆至pMD-T载体,经酶切分析和序列测定后,正向插入的重组子命名为pMD-cAmy,插入片段长1521bp,编码499个氨基酸残基的多肽,分子量55 998kD.克隆的β-淀粉酶cDNA与报道的甘薯另一品种Kokei No.14的mRNA 有99%的序列相同,与Calystegia sepium β-淀粉酶mRNA有87%相同.重组子pMD-cAmy经I PTG诱导后,胞内可溶性提取物经凝胶电泳和活性染色,出现明显的淀粉酶活性带.SDS-PAGE表明,大肠杆菌表达的β-淀粉酶亚基的分子量约为50kD.重组子pMD-cAmy在淀粉平板上形成明显的水解圈,说明甘薯β-淀粉酶cDNA不仅能在大肠杆菌表达,而且能将有活性的β- 淀粉酶分泌到胞外.对重组子pMD-cAmy和甘薯块根可溶性提取物的比较发现,大肠杆菌表达的β -淀粉酶与甘薯块根的β-淀粉酶除迁移率不同外,对淀粉酶活性抑制剂EDTA和β-巯基乙醇的敏感性相同.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张义正	四川大学生命科学学院四川省分子生物学及生物技术重点实验室	150	2059	26.0	38.0
2	张勇为	四川大学生命科学学院四川省分子生物学及生物技术重点实验室	6	35	3.0	5.0