Sj28GST基因克隆和高效表达产物的纯化

• 作者: 刘丰 季旻 张兆松 朱翔 李光富 李春玲 王勇 王新军 蔡晓萍
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫中国大陆株 28kDa谷胱甘肽-S-转移酶 分子克隆 包涵体 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 15-18
• 页数: 4页
• 分类号: R383.2
• 字数: 3005字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2004.01.004

摘要

目的从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中克隆28kDa 谷胱甘肽-S-转移酶(Sj28GST)基因,获得用于疫苗和T细胞表位研究的高纯度重组融合蛋白28GST-TRX.方法应用引物特异性PCR技术,从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中扩增Sj28GST基因,经琼脂糖凝胶电泳结合碱基序列分析鉴定后,采用定向克隆技术构建Sj28GST-TRX融合蛋白重组表达载体并诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)的表达,用Western-blotting测定以融合蛋白方式表达的Sj28GST的免疫原性,通过包涵体纯化结合Ni+柱亲和层析获得高纯度重组融合蛋白.结果 Sj28GST PCR产物为约640bp,其碱基序列(633bp)和推导的氨基酸序列(211aa)与GenBank报道一致;获得了Sj28GST-TRX重组质粒;28GST-TRX融合蛋白在大肠杆菌以包涵体形式高效表达;在分子量为约43kDa处有一能与羊抗Sj28GST抗体产生特异性反应的含28GST融合蛋白条带;包涵体纯化法结合Ni+亲和层析可获得高纯度的重组融合蛋白.结论获得到了日本血吸虫中国大陆株28GST分子的全长基因和高纯度重组28GST-TRX融合蛋白,该融合蛋白具有天然Sj28GST免疫原性.