鸡γ-干扰素基因在大肠杆菌中的高效表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 丁忠庆 刘胜旺 孔宪刚 宋铭忻
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 鸡IFN-γ 融合蛋白 表达 抗体制备
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 255-257
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 3621字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4545.2004.03.017

摘要

将克隆得到的鸡IFN-γ基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pPROExTMHT的Pst I和Kpn I位点上,构建了重组表达质粒pPROEXTMHT-IFN-γ,经序列分析鉴定,确证目的基因克隆入载体的预期位点.将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,于37 C不同时间诱导培养,SDS-PAGE电泳表明,该基因在大肠杆菌中发生高水平表达,表达的鸡IFN-γ融合蛋白相对分子质量约为22 000.重组蛋白占菌体总蛋白的33%.经Western blot鉴定,该重组蛋白质具有生物学活性.包涵体被6 mol/L盐酸胍裂解后,通过镍离子亲和树脂进行了纯化.用所获得的重组鸡IFN-γ融合蛋白及其纯化产物经3次肌肉注射于新西兰白兔,制备了兔抗鸡IFN-γ多克隆抗体.琼脂扩散结果表明,多克隆抗体可与纯化的鸡IFN-γ重组蛋白发生特异性反应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孔宪刚		6	114	4.0	6.0
2	丁忠庆		4	36	4.0	4.0
4	刘胜旺		5	75	4.0	5.0
7	宋铭忻		1	11	1.0	1.0