家兔MT-Ⅰ基因克隆及其在大肠杆菌中的表达与分离

• 作者: 严斌 孙颖 李廷宝 杨芳 贺智敏 陈主初 黄宏科
• 来源期刊: 生物医学工程学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 金属硫蛋白-Ⅰ 克隆 原核融合表达载体 重组融合蛋白 亲合层析
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 76-80
• 页数: 5页
• 分类号: R378.21
• 字数: 3752字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1001-5515.2004.01.020

摘要

采用RT-PCR方法扩增镉诱导后的家兔肝脏金属硫蛋白-Ⅰ(Metallothionein-Ⅰ,MT-Ⅰ)基因的cDNA全长,克隆入原核融合表达载体pQE40,转化大肠杆菌M15.菌落印迹法检测阳性菌株;Western blotting 分析重组融合蛋白的表达方式;经SDS-PAGE电泳后,ImageMaster VDS software 分析融合蛋白诱导表达条件;并采用Ni-NTA agarose纯化融合蛋白.结果发现,重组融合蛋白在原核细胞中表达存在可溶和不可溶(包涵体)两种形式,表达量随IPTG诱导时间延长而增加,9 h达高峰(占菌体不溶性蛋白总量的57.4%),经Ni-NTA亲合层析纯化得到重组融合蛋白,为进一步分离目的蛋白单体并研制和开发这一产品提供了可靠依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贺智敏		3	5	1.0	2.0
2	严斌		2	28	2.0	2.0
3	黄宏科		2	28	2.0	2.0
4	李廷宝		2	28	2.0	2.0
5	孙颖		1	3	1.0	1.0
6	杨芳		1	3	1.0	1.0
7	陈主初		1	3	1.0	1.0