人中性粒细胞多肽1真核表达载体的构建与表达

• 作者: 刘娟 刘秋平 孙永涛 李光玉 王福祥 翟嵩
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 人中性粒细胞多肽1 基因克隆 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2004,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 894-896
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 3523字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2004.10.023

摘要

目的构建人中性粒细胞多肽1(HNP1)基因真核表达载体,为探讨HNP1基因工程生产的可能性奠定基础.方法从健康人中性粒细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出HNP1基因cDNA片段,将纯化PCR产物与 pMD18-T载体连接,经酶切鉴定及测序确证,将其亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中.用脂质体转染COS-7细胞,用BA-ELISA法检测转染细胞上清中HNP1的表达.结果从人中性粒细胞中克隆出人HNP1基因,经测序分析与GenBank公布的人HNP1核苷酸序列完全一致,并在COS-7细胞中获高效瞬时表达.结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO/HNP1,为后续哺乳动物工程细胞株的建立奠定了实验基础.