幽门螺杆菌HpaA-CtxB融合蛋白的表达及其免疫原性研究

• 作者: 刘淼 吴利先 杨致邦 林珊珊
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 粘附素 霍乱毒素B亚单位 融合蛋白 口服疫苗 免疫应答
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 306-310
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3982字
• 语种: 中文

摘要

目的:探讨幽门螺杆菌融合蛋白粘附素-霍乱毒素B亚单位(HpaA-CtxB,HCTB)经口服免疫小鼠后,机体产生的免疫应答.方法:用PCR方法扩增HpaA和CtxB两个目的基因片段,将它们分别克隆至pET-32a(+)和pQE-30质粒上,然后同时插入pQE-30表达载体中,构建含双基因的的表达质粒pQE-HCTB,转化E.coli DH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白HCTB;Western blot分析其免疫反应性.融合蛋白经镍离子柱纯化后,HCTB和HpaA分别给小鼠灌胃进行免疫, ELISPOT和ELISA分别检测小鼠胃粘膜、派伊尔小结(Peyer′s patches, PP)抗原特异性抗体分泌细胞(ASC),和血清IgG、IgA、小肠粘液sIgA和粪便sIgA.结果:经测序HCTB融合基因片段由1 161 bp组成,为编码387个氨基酸残基的多肽.经SDS-PAGE分析相对分子量(Mr)约为 40 000.可溶性表达占全菌的25%以上,经亲和层析后可获得纯度为92%以上的重组蛋白.Western blot分析其能分别与HpaA抗血清和CT抗血清特异性反应.灌胃免疫小鼠后ELISPOT和ELISA检测结果,胃和PP sIgA-ASC、IgG-ASC数量明显增加,尤以sIgA-ASC为甚,同时血清IgA、IgG,粪sIgA,肠粘液sIgA也明显高于HpaA组和对照组(P＜0.05和P＜0.01).结论:融合蛋白HCTB经口服免疫可有效诱导粘膜免疫应答,产生高水平的sIgA,发挥局部粘膜免疫作用.HCTB可作为集预防和治疗为一身的Hp候选口服疫苗.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨致邦	重庆医科大学微生物学教研室	119	522	12.0	17.0
2	吴利先	大理学院微生物学教研室	52	158	8.0	9.0
3	刘淼	重庆医科大学微生物学教研室	11	74	5.0	8.0
4	林珊珊	重庆医科大学微生物学教研室	9	41	4.0	6.0