受血糖调控的定点突变胰岛素原真核表达载体的构建

• 作者: 刘优萍 刘赟 周文中 张芳林 张迪 李果 李纪平 杨键 罗敏
• 来源期刊: 上海第二医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 糖尿病 葡萄糖-6-磷酸酶启动子 furin 胰岛素原 基因突变技术
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 14-17
• 页数: 4页
• 分类号: R587.1|Q754
• 字数: 3713字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2004.01.005

摘要

目的构建受血糖调控的含葡萄糖-6-磷酸酶(G6p)启动子的定点突变胰岛素原基因真核表达载体.方法应用基因突变技术(重叠延伸拼接法)改变胰岛素原C肽两端的氨基酸序列,使之能被存在于大多数细胞中的furin酶所识别并剪切为成熟的胰岛素,新序列命名为INS/furin;应用基因重组技术将G6p启动子序列替代真核表达载体pIRES中的CMV启动子序列,并将INS/furin亚克隆至pIRES的多克隆位点B.结果SgfⅠ和Sac Ⅰ、XbaⅠ和NotⅠ两种组合的双酶切及特定引物测序均证实载体构建成功.结论带有G6p启动子的含定点突变胰岛素原基因的真核表达载体有望成为糖尿病基因治疗理想的候选载体.