人内皮活化相关新基因eola1的原核表达及鉴定

• 作者: 孙荣距 杨宗城 梁自文 罗向东 蔡震
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 原核表达 重组质粒 包涵体
• 年，卷（期）: 2004,（23）
• 所属期刊栏目: 专题报道:烧伤创面修复与内皮细胞的研究
• 页码范围: 2108-2110
• 页数: 3页
• 分类号: R394-33|R394.3
• 字数: 2647字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2004.23.008

摘要

目的获得内皮高表达脂多糖相关因子1(eola1)表达蛋白并对其进行分析鉴定.方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法从人ECV-304细胞中扩增出eola1基因开放阅读框,构建重组质粒,测序鉴定后转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,裂解细菌抽提蛋白,目的蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western免疫印迹鉴定.结果测序鉴定eola1开放阅读框成功插入PET-46-EK/LIC质粒;重组质粒在大肠杆菌中成功表达人eola1蛋白,主要以包涵体形式存在,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定其分子质量约20×103,Western blot验证出目的蛋白特异表达.结论应用原核表达系统能够成功获得目的蛋白,为下一步制备eola1单克隆抗体及基因功能研究打下基础.