人趋化因子SLC原核表达载体的构建与表达

• 作者: 何凤田 罗福康 郑红
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: SLC 突变 融合表达 载体 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2004,（14）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1231-1234
• 页数: 4页
• 分类号: Q782|R392.11
• 字数: 3739字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2004.14.001

摘要

目的构建趋化因子SLC(secondary lymphoid-tissue chemokine)的硫氧还蛋白融合表达载体并表达融合蛋白.方法从人扁桃体中提取总RNA,再进行RT-PCR,扩增SLC成熟蛋白基因,并在5'和3'分别添加Nco Ⅰ和EcoRⅠ酶切位点,通过这两个酶切位点重组于pET32a(+)载体上,转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,经突变删除因Nco Ⅰ位点引入而在肠激酶位点和目的基因间多余的3个氨基酸,DNA再测序检测突变结果,SDS-PAGE分析其表达,并通过金属离子亲和层析、除盐、弱阳离子交换层析,得到纯化的融合蛋白,Western blot验证纯化的融合蛋白.结果成功构建了SLC天然蛋白的硫氧还蛋白融合表达载体,表达并纯化出融合蛋白,Western blot证明该融合蛋白能与羊抗人SLC一抗结合.结论构建的天然SLC硫氧还蛋白融合表达载体以可溶性蛋白的方式稳定表达SLC硫氧还蛋白,并对融合蛋白进行了初步纯化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑红	第三军医大学西南医院实验研究中心	36	309	9.0	16.0
2	何凤田	第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室	127	592	12.0	15.0
3	罗福康	第三军医大学西南医院实验研究中心	14	74	4.0	8.0