SARS冠状病毒核衣壳蛋白在酵母中的表达与活性检测

• 作者: 刘如石 夏宁邵 张军 张智洪 杨坤宇 梁良 邱义兰
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 严重急性呼吸综合症 核衣壳蛋白 毕赤酵母 真核表达
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 540-546
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 字数: 6310字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2005.04.007

摘要

用PCR扩增SARS冠状病毒N蛋白全长cDNA,克隆到酵母表达载体pPIC3.5K,构建pPIC3.5K-SCoVN酵母表达质粒.表达质粒线性化后电转化到毕赤酵母GS115中,经G418-RDB,MM/MD平板与PCR扩增筛选获得His+Mut+重组菌株.比较研究了不同的培养基、溶解氧以及甲醇浓度对菌株生长与重组蛋白表达的影响.结果表明:FBS培养基最适宜重组菌的生长与表达,溶氧对菌体的生长与表达有显著的影响,甲醇诱导最佳终浓度为1%(V/V),SDS-PAGE分析重组蛋白的表达量,发现重组N蛋白表达量占细胞总蛋白的6%,每升培养基可以生产410mg重组N蛋白,生物量达45 OD600.Western blotting结果表明,重组N蛋白对鼠源单克隆抗体以及SARS病人恢复期血清具有较强的特异性反应.对摇瓶培养条件进行了发酵罐放大实验,结果生物量达到348 OD600,表达量达到2.5g/L,分别为摇瓶表达的7.7倍和6.1倍,为SARS早期血清学诊断研究以及为N蛋白在病毒复制以及致病机理的研究奠定了一定的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邱义兰	湖南师范大学生命科学学院生物化学与分子生物学系	23	124	7.0	10.0
2	刘如石	湖南师范大学生命科学学院生物化学与分子生物学系	34	210	8.0	13.0
6	杨坤宇		1	1	1.0	1.0
7	张智洪		1	1	1.0	1.0
8	梁良		1	1	1.0	1.0
9	张军		1	1	1.0	1.0
10	夏宁邵		1	1	1.0	1.0