野生型和突变型PS1-EGFP真核共表达载体的构建与鉴定

• 作者: 刘宪霜 孙永馨 方伯言 贾建平 邵延坤
• 来源期刊: 神经解剖学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: PS1(Presenilin-1) 增强绿色荧光蛋白 基因突变
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 631-635
• 页数: 5页
• 分类号: R74
• 字数: 3150字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7547.2005.06.012

摘要

为了构建人野生型和突变型PS1(早老素-1,presenilin-1)-EGPF共表达蛋白的真核表达重组质粒pcDNA3.1/PS1-EGFP,本研究应用下述方法:对野生型pcDNA3.1/PS1(WT)质粒,采用一步法定点突变技术构建pcDNA3.1/PS1(C407G)突变质粒;合成两对引物,利用PCR技术从pEGFP-C1质粒合成EGFP cDNA片断,在EGFP转录起始密码子ATG之前导入一BamHⅠ酶切位点,利用与pcDNA3.1/PS1质粒共存的另一EcoRⅠ酶切位点,将合成的EGFP片断通过BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ两个位点分别克隆入野生型及突变型pcDNA3.1/PS1质粒的多克隆位点中,从而构建了野生型和突变型PS1与增强绿色荧光蛋白共表达载体.经限制性内切酶双酶切鉴定及DNA测序证实此蛋白共表达载体构建成功.利用此重组质粒瞬时转染SH-SY5Y细胞,72 h后荧光显微镜(激发波长488 nm)观察细胞内有绿色荧光蛋白表达.本研究成功构建了人野生型和突变型PS1-EGFP的真核表达载体,为下一步建立细胞模型,研究突变型PS1的生物学功能以及PS1在AD发病机制中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贾建平	首都医科大学宣武医院神经内科	445	3162	26.0	37.0
2	孙永馨	首都医科大学宣武医院神经内科	23	172	7.0	12.0
3	方伯言	首都医科大学宣武医院神经内科	14	65	5.0	7.0
4	邵延坤	首都医科大学宣武医院神经内科	8	45	3.0	6.0
5	刘宪霜	首都医科大学宣武医院神经内科	2	5	2.0	2.0