牙鲆生长激素基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

• 作者: 刘滨 张学成 臧晓南 茅云翔 隋正红
• 来源期刊: 高技术通讯
• 关键词: 牙鲆 生长激素基因 大肠杆菌 融合表达
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 资源环境技术
• 页码范围: 99-104
• 页数: 6页
• 字数: 5683字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-0470.2005.03.020

摘要

采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法, 从牙鲆(Paralichthys olivaceus)脑垂体总RNA中扩增出编码牙鲆生长素(GH)成熟肽基因序列.重组至融合表达载体pGEX-4T-3中,构建成牙鲆GH基因融合表达载体pGEX-gh, 转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达.经SDS-PAGE电泳显示在45kD处有特异的蛋白条带出现,该蛋白的表达量随诱导时间的延长而增加,3h达最高值,达到细胞总蛋白的18.3%.该融合蛋白在胞内主要以包涵体状态存在,经优化表达条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,经Glutathione Sepharase 4B凝胶纯化后用Western-blotting检测表明其为牙鲆生长激素,并通过酶联免疫吸附受体法证实其具有生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张学成	中国海洋大学海洋生命学院	122	1664	22.0	34.0
2	臧晓南	中国海洋大学海洋生命学院	25	299	10.0	16.0
3	刘滨	中国海洋大学海洋生命学院	36	321	9.0	17.0
4	茅云翔	中国海洋大学海洋生命学院	39	535	10.0	22.0
5	隋正红	中国海洋大学海洋生命学院	46	403	10.0	18.0