成熟志贺毒素全长与截短A亚单位在E.coli中的表达及纯化

• 作者: 喻华英 王景林 高丰
• 来源期刊: 微生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 志贺毒素A亚单位 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 11-15
• 页数: 5页
• 分类号: R378.2
• 字数: 3711字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-7021.2005.05.003

摘要

应用PCR技术从Ⅰ型痢疾志贺菌(Shigella dysenteriae type Ⅰ)中,扩增出约895 bp的成熟ShT-A基因片段,克隆至pGEM-T载体申,经蓝白斑筛选、PCR和双酶切鉴定正确后,命名为pGEM-TA2.测序结果表明,ShT-A与GenBank中ShT-A序列完全一致.用BamHⅠ和Kpn Ⅰ双酶切克隆质粒,得到为895 bp成熟ShT-A与pQE30原核重组表达载体连接,构建原核重组表达质粒.经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳观察,没有目的蛋白表达.DNAsis软件分析ShT-A基因序列,发现513 bp处有HindⅢ位点,故以ShT-A上游引物的BamHⅠ和HindⅢ从pGEM-TA2切出一个513 bp的截短片段,重新插入pQE30表达载体,得到pQE30-A513重组表达质粒,转化E.coli M15,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳观察,在20 ku处出现1条特异性的表达蛋白带,与截短ShT-A513分子量相符,表达量约占菌体总蛋白的37.4%,表达形式为包涵体.为抗体的制备提供了必要的物质基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王景林	军事医学科学院微生物流行病研究所	44	147	6.0	9.0
2	高丰		3	3	1.0	1.0