炭疽毒素PA在E.coli中的表达、纯化及其生物活性分析

• 作者: 凌焱 周围 张京生 李伟东 李玉霞 梁龙 毛赟赟 胡伟 陈惠鹏
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 炭疽毒素 保护性抗原 融合表达 纯化 弗林蛋白酶
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 116-120
• 页数: 5页
• 分类号: R378.7
• 字数: 4044字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2008.02.004

摘要

目的:构建pET-32a(+)-PA重组质粒,实现融合蛋白Trx-PA在大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)中的表达,并获得有生物学活性的PA.方法:采用PCR的方法扩增PA的编码序列,并且与pET-32a(+)载体的Trx编码区融合产生pET-32a(+)-PA重组质粒,将重组质粒转化至感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达pET-32a(+)-PA,通过SDS-PAGE和Western印迹进行分析.利用Ni2+金属亲和层析纯化表达产物,通过梯度透析进行复性.通过蛋白酶降解和细胞毒性实验分析Trx-PA的生物学活性.结果:成功构建pET-32a(+)-PA重组质粒,并纯化了Trx-PA融合蛋白.SDS-PAGE分析表明融合蛋白相对分子质量大小正确,经纯化复性后,蛋白纯度达到76%.Trx-PA在体内和体外均能被弗林蛋白酶(furin酶)降解.Trx-PA的正确降解是致死因子(lethal factor,LF)进入小鼠巨噬细胞Raw264.7内并产生细胞毒性的基础.结论:重组Trx-PA融合蛋白能在E.coli BL21(DE3)中有效表达,并表现出生物学活性.