胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅣA基因的克隆与表达及间接ELISA方法的建立

• 作者: 刘建杰 周锐 徐晓娟 陈焕春 陈美玲 黄红亮
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅣ 克隆与表达 ELISA 鉴别诊断
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 生物制药
• 页码范围: 294-299
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 5024字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2005.02.024

摘要

参照APP血清1型apxⅣA基因序列合成了一对特异性引物,从本实验室分离鉴定的胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清2型中扩增了apxⅣA基因5'端2445bp的片段.将该片段克隆到原核表达载体pET-28b的T7启动子下游,与6×His Tag融合,再转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下表达大小约90kD的蛋白.表达产物以包涵体的形式存在,且能与APP标准阳性血清发生特异性反应.将包涵体变性和复性后包被酶标板建立了间接ELISA方法(ApxⅣA-ELISA),特异性良好.用ApxⅣA-ELISA检测猪胸膜肺炎三价(1、2和7型)灭活菌苗和基因工程类毒素菌苗免疫猪血清抗体均为阴性,而1、2、7型APP活菌感染动物的血清抗体均为阳性.实验证明,ApxⅣA-ELISA不仅可以用于检测所有血清型APP的抗体,而且还可以用于APP自然感染猪和灭活菌苗免疫猪的鉴别诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐晓娟	华中农业大学动物医学院动物病毒室	23	359	11.0	18.0
2	陈焕春	华中农业大学动物医学院动物病毒室	331	4866	36.0	53.0
3	黄红亮	华中农业大学动物医学院动物病毒室	10	117	7.0	10.0
4	周锐	华中农业大学动物医学院动物病毒室	23	337	10.0	18.0
5	陈美玲	华中农业大学动物医学院动物病毒室	7	93	5.0	7.0
6	刘建杰	华中农业大学动物医学院动物病毒室	13	379	9.0	13.0