EB病毒GST-Rta融合蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备

• 作者: 张林 徐永春 朱银华 梁伟波 苟航 贾静 陈文婕
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 融合蛋白 亲和层析 多克隆抗体 EB病毒
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 665-667,699
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 3135字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2005.05.017

摘要

目的表达和纯化EB病毒的重组融合蛋白谷胱氨肽S转移酶(GST)-Rta185和GST-Rta150,并制备特异性多克隆抗体.方法质粒表达载体pGEX-R185I、pGEX-R150I和 pGEX-5X-3分别转入大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Glutathione Sepharose 4B 亲和层析柱纯化目的蛋白.将纯化后的GST-R185、GST-R150和GST蛋白免疫新西兰大白兔制备抗血清.结果在细菌裂解液中检测到高表达量的融合蛋白,经Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST-Rta融合蛋白.应用Western blot和ELISA方法检测证实,用纯化的GST-Rta蛋白免疫家兔得到了特异性的多克隆抗体.结论通过上述方法制备出来的融合蛋白纯度较高,免疫家兔获得的多克隆抗体具有良好的特异性,为研究EB病毒Rta蛋白及与EB病毒相关疾病的诊断和治疗提供了重要的条件.