北京地区人偏肺病毒核蛋白基因的原核表达及抗原活性分析

• 作者: 丁雅馨 曹守春 朱汝南 李国华 赵林清 钱渊
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人偏肺病毒 核蛋白 原核表达 抗原活性分析
• 年，卷（期）: 2005,（12）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 1027-1030
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3087字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2005.12.020

摘要

目的用大肠杆菌表达获得人偏肺病毒主要结构蛋白N蛋白,为下一步的深入研究奠定基础.方法从重组质粒pUCm-N1816中PCR扩增获得N基因,用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后插入到原核表达载体pET30a(+)中,得到重组表达质粒pET30a-N1816,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导培养.SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达和抗原性.结果经双酶切和测序证明1.2kb N1816基因正确插入pET30a中,并具有正确的读码框架,得到预期的pET30a-N1816重组原核表达质粒.37℃,1 mmol/LIPTG诱导培养6 h后产生大量带6个组氨酸标记的重组N蛋白,主要以包涵体形式存在,占细胞总蛋白的20%左右.N蛋白粗提物经Co2+亲和层析获得较理想纯化.Western blot结果显示,体外所表达的蛋白能和特异性抗血清及人血清反应.结论本研究成功构建了重组pET30a-N1816原核表达质粒,N蛋白获得了高效表达,并且具有特异抗原活性,可用于人偏肺病毒的深人研究.