血管生成素与绿色荧光蛋白融合蛋白的表达及纯化

• 作者: 李凌云 许正平
• 来源期刊: 南京医科大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 血管生成素 增强型绿色荧光蛋白 免疫印迹分析 金属螯合亲和层析 融合表达
• 年，卷（期）: 2005,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 437-442
• 页数: 6页
• 分类号: Q786|R73-35+1
• 字数: 5104字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2005.07.002

摘要

目的:表达并纯化血管生成素(ANG)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白,以进一步探讨血管生成素的生物学功能.方法:PCR扩增人ANG基因,将其与EGFP基因融合后克隆到高表达载体pMFHT,构建了原核表达质粒pHIS-ANG-EGFP.该质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并用金属螯合亲和层析纯化目的蛋白.激光共聚焦显微镜和Westernblot鉴定融合蛋白的表达情况.结果:重组蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并从破菌上清中一步纯化目的蛋白,纯度可达95%以上.Western blot分析表明表达产物具有良好的抗原性和特异性.诱导表达的菌体在激光共聚焦显微镜下可发射明亮的绿色荧光.结论:成功的表达并纯化了ANG-EGFP融合蛋白,利用EGFP的荧光示踪作用,该融合蛋白可用于血管生成素核转位和胞内共定位蛋白质研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李凌云	南京医科大学细胞生物学与医学遗传学系	21	41	4.0	5.0
2	许正平	浙江大学医学院公共卫生系	31	180	6.0	13.0