增强型绿色荧光蛋白的基因克隆、表达及蛋白纯化

• 作者: 叶菁 张秀敏 曲萍 隋延仿
• 来源期刊: 陕西医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因复制 基因表达调控 @增强型绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 论著·临床研究
• 页码范围: 1235-1237
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2340字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7377.2006.10.001

摘要

目的:研究增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)基因在大肠杆菌中的基因克隆、重组表达及纯化.方法:采用PCR方法克隆EGFP全长cDNA序列,构建原核表达载体pGEX4T-1-EGFP,经过DNA序列测定证实其序列正确,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,用谷胱甘肽-Sepharose 4B层析法纯化GST-EGFP融合蛋白.结果:成功地克隆了EGFP全长cDNA序列,并进行原核表达以及蛋白的纯化,GST-EGFP的表达量占菌体蛋白量的40%以上.经纯化后纯度高于90%.菌体超声裂解后上清液及其纯化产物在长波紫外线的照射下,发出明亮的绿色荧光.结论:本研究为应用EGFP追踪细胞吞噬功能等动态活动奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曲萍	第四军医大学基础医学教学实验中心	56	259	9.0	13.0
2	隋延仿	第四军医大学基础医学教学实验中心	88	384	10.0	13.0
3	张秀敏	第四军医大学基础医学教学实验中心	53	243	8.0	11.0
4	叶菁	第四军医大学基础医学教学实验中心	79	357	10.0	13.0