人可溶性B淋巴细胞刺激因子基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 冯建男 孙剑 孙瑛勋 沈倍奋 胡美茹 黎燕
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: B细胞刺激因子 表达 B细胞
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 171-173
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11|Q786
• 字数: 2807字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2006.02.012

摘要

目的: 钓取人B细胞刺激因子基因, 构建其表达的大肠杆菌工程菌, 并体外表达、纯化可溶性B细胞刺激因子.方法: 从人外周血单个核细胞(PBMC)中提取总RNA并逆转录得到cDNA, 用PCR扩增目的基因, 连接到原核生物表达载体pET-30a上.制备质粒后, 酶切、进行菌落PCR及DNA测序对其进行鉴定.然后转化大肠杆菌BL21(DE3)并表达.对纯化的目的蛋白进行肽质量指纹分析、鉴定, 并进一步做体外B细胞刺激试验.结果: RT-PCR钓取出可溶性B细胞刺激因子基因片段.DNA测序结果与报道序列完全一致.在IPTG诱导下, 目的基因在工程菌中表达.利用镍金属螯合琼脂糖凝胶亲和层析柱分离.纯化目的蛋白的肽质量指纹图经Mascot搜索与B细胞刺激因子吻合.纯化的蛋白在体外可刺激B细胞增殖.结论: 成功地克隆可溶性B细胞刺激因子基因, 表达的纯化目的蛋白是具有生物学活性的B细胞刺激因子.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈倍奋	军事医学科学院基础医学研究所	213	1497	18.0	31.0
2	黎燕	军事医学科学院基础医学研究所	139	930	14.0	25.0
3	胡美茹	军事医学科学院基础医学研究所	38	186	7.0	12.0
4	孙剑	天津大学药物科学与技术学院分子细胞药理系	21	68	5.0	7.0
6	孙瑛勋	军事医学科学院基础医学研究所	14	84	5.0	8.0
7	冯建男	军事医学科学院基础医学研究所	12	25	2.0	3.0